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  免疫印跡(WB)

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簡介 免疫印跡法(western blot,WB)是一種將高分辨率凝膠電泳和免疫化學分析技術相結合的雜交技術,用于檢測細胞或組織提取物中的蛋白表達水平。首先利用電泳技術將不同分子量蛋白分離,然后轉移至硝酸纖維素膜(NC膜)或PVDF膜,再利用抗原抗體結合并染色的原理,檢測目的蛋白的表達水平。

實驗原理 Western blot采用聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物質是蛋白質,“探針”是抗體,“顯色”用標記的二抗,經過PAGE分離的蛋白質樣品,轉移到固相載體(例如NC膜或PVDF膜)上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質,且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原,與對應的抗體起免疫反應,再與酶或同位素標記的第二抗體起反應,經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術也廣泛應用于檢測蛋白水平的表達。

步驟示意圖
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 裂解液    上樣緩沖液        脫脂奶粉    內參抗體
 蛋白酶抑制劑    預制膠    電轉液    BSA    二抗
 蛋白定量    PAGE 膠配制            標簽抗體
     蛋白 marker            ECL化學發光液檢測
     染色液            

 

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